乙型肝炎表面抗原（HBsAg）操作规程.docx

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1、乙型肝炎表面抗原(HBSAg)操作规程1 .操作步骤：(1)配液：配制工作浓度洗涤液(以纯化水做25倍稀释)(2)编号：将样品对应微孔按序编号(共预留阴性对照孔3孔、阳性对照1孔、建议预留空白对照1孔)(3)加样：加入75微升待测样本和阴、阳性对照与反应孔中。温育：用封片纸覆盖反应板后，置37C温育60分钟。(5)加酶标抗体：取出反应板，撕去封片，在已加入待测样本和阴性、阳性对照孔中加入50微升酶结合物。微孔振荡器或手工轻轻振荡10秒钟。(6)温育：用封片纸覆盖反应板后，置37C温育30分钟。(7)洗涤：手工：扣去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置20秒，扣去洗涤液，重复5次在吸水纸上拍干。洗板

2、机：将孔内液体甩干。选择5次洗涤程序，洗板后在吸水纸上拍干。显色：每孔加入显色剂A,B液各1滴(50微升)，轻轻振荡匀，用封板纸覆盖反应板后，将反应板放置37C孵化30分钟。(8)终止:每孔加终止液1滴(50微升)，混匀。(9)测定：用酶标仪读数，波长450n11.(建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长63Onm或630相近的波长)若需扣除显色剂空白，则先用显色剂空白对照孔校零，然后读取各孔OD值。2 .结果判断(1)目测：在白色背景下观察各孔显色情况，有明显黄色者为乙型肝炎表面抗原(HBSAg)阳性；无色者为乙型肝炎表面抗原(HBSAg)阴性。(2)酶标仪检测： 临界值(CUT/OFF)计算：COV：Cut-offValUe参考值PC：阳性对照OD值NCx:阴性对照平均OD值。NCx=(NC1+NC2+NC3)3检测有效性:NCx0.EPC1.0,则检测结果有效。C0V=NCx+0.100S：待测样品的OD值，S/COV：待测样本和COV的比值。 阳性判定：样品OD值S/C0V2L0者判定为HBSAg阳性。 阴性判定：样品OD值SC0V1.0者判定为HBSAg阴性。