黄花菜发酵液的化妆品功效评价.docx
白质、脂类、胡萝卜素、糖类以及丰富的微量元素。食用黄花菜不仅能提高皮肤的弹性和紧致度，防止老化，而且有助于保持皮肤白皙。黄花菜的优势在于：其花蕾及根等部位中含有大量生物活性成分，例如：类黄酮类、生物碱类、皂甘等。黄花菜中黄酮类化合物是其重要有效成分之一,具有延缓衰老、抗氧化、清除自由基等功能。黄花菜还可以表现出抗菌、抗炎、有效改善睡眠等多方面的生物活性功能，而且其在市场中易获取，原料廉价，成分简单无害。由于市场上的化妆品仅含有低比例黄花菜成分并且有限的提取条件使其不能充分发挥黄花菜的功效，因此，选用微生物发酵的方法制备黄花菜发酵液。通过对发酵条件的控制、选择合适的菌种和发酵工艺可以大规模生产所需产品。发酵技术的优点在于无危险性，易操作性。大量实验证明，经过发酵后的原料活性物含量增多，抗衰老性能增强，抗炎效果上升。本文使用植物乳杆菌和酿酒酵母菌发酵制备得到两种黄花菜发酵液，并对其抗氧化性、抗炎性、美白性和安全性进行评价，以期弥补当前黄花菜发酵液在化妆品领域研究的不足，为开发与制备微生物发酵成分相关的化妆品的原料提供理论支撑。摘要：使用植物乳杆菌和酿酒酵母菌发酵制得了两种黄花菜发酵液，考察了样品对HaCaT细胞存活率的影响，分析了其抗炎性功效、抗氧化功效、美白功效、安全性功效。结果表明，与水提液（空白对照）相比，两种发酵液的抗氧化能力更强。在细胞水平上，两种黄花菜发酵液均表现出对UVB诱导损伤细胞的修复作用，相对于经过UVB照射后的细胞模型组，细胞工型胶原蛋白（CoL-I）、过氧化氢酶（CAT）活力均提高。两种黄花菜发酵液的酪氨酸酶活性抑制率远高于水提液，表现出良好的美白效果。通过HaCaT细胞中炎性因子IL-6、TNF-和COX-2表达量可以看出，样品组中炎性因子的表达量显著低于模型组，说明黄花菜发酵液的抗炎性能力大于水提液。通过鸡胚绒毛尿囊膜实验（HET-CAM）可以得出，样品作用其前后均无出血现象，表明黄花菜发酵液无刺激性。结论以黄花菜为研究对象，采用植物乳杆菌和酿酒酵母菌发酵制备两种黄花菜发酵液，从抗氧化、抗炎性、美白性和安全性多方面验证黄花菜发酵液可修复UVB给皮肤带来的伤害。本文选取体积分数为2.5%的样品应用于实验。在抗氧化功效评价中，黄花菜水提液和黄花菜发酵液均能有效地清除DPPH自由基，且与浓度呈正相关，表明黄花菜水提液和发酵液具有一定的抗氧化活性，其中Sl的IC50为11.753%,S2的IC50为9.944%,S3的IC50为11.558%«3种溶液对羟基自由基的清除率随着体积分数的增加而提高，其中Sl的IC50为82.892%,S2的IC50为82.154%,S3的IC50为82.034%。空白组的COL-I表达量为6.14ng/mL；UVB照射能够引起氧化应激反应激活胶原蛋白酶（MMPS）,从而降低胶原蛋白含量。模型组细胞内的COL-I表达量降为4.52ng/mL；经过Sl>S2、S3作用后，细胞内COL-I表达量显著增加到5.03、6.00、6.19ngmLo空白组的CAT表达量为3.44ng/mL；氧化应激损伤下的CAT表达量显著降低，模型组的CAT表达量仅为1.52ng/mL；而SI.S2、S3均能显著提高细胞中CAT的表达量，分别为2.06、2.25、2.40ng/mLo在抗炎性评价实验中，空白组的IL-6、TNF-a、CoX-2的表达量分别为0.8、0.9和0.9ngmL,模型组对3种炎性因子蛋白的表达量分别为3.2、3.4和1.3ngmLo而用SI、S2、S3处理细胞后，炎性因子蛋白的表达量显著降低，因此，发酵液和水提液有一定的抗炎效果。在安全性功效评价中，使用体积分数0.9%NaCl水溶液作为阴性对照，刺激评分为0.04,血管无溶血；Sl>S2、S3的刺激评分为0.09、0.08、0.06,血管无溶血，表明黄花菜水提液及发酵液均无眼刺激性。黄花菜发酵液可作为抗衰老、美白、抗炎、抗氧化等功效性原料应用于化妆品中。图文导读表1Real-TimePCR引物序列Table1Real-TimePCRprimersequences基因方向序列-actinFTggcacccagcacaatgaaRTggcacccagcacaatgaaTNF-FAggacagaagagcaactgagatcgRTtgggatgctgacactccatgcaIL-6FGacagccactcacctcttcaRTtcaccaggcaagtctcctc表2样品加液要求Table2SampleliquidadditionrequirementsTToCCG不同体积分数的样品水溶液mL11无水乙醇mL2233DPPH溶液mL11无水乙醇mL11注：“一”为此步骤不加该溶剂表3HET-CAM终点评估法的眼刺激性预测模型Table3PredictionmodelofeyemtatonbasedonHETCAMendpointassessmentmethod评分标准刺激性分类ES<6无刺激性6ES<12轻度剌激性12ES<15中度刺激性ESM15用度刺激性O 0.3125 0.625 1.25 2.55体积分数/%10 20 40100806040201图1不同体积分数Sl、S2、S3的溶液对细胞存活率的影响Fig. 1 EffectsofSl、S2、S3Withdifferentvolumefractiononthesurvivalrateofcell.59 5 O 3总U)亩均«*XOUAIL-6；B-TNF-;C-COX-2；表示与空白相比.差异高度显著(P<0901);“*”表示与模型组相比,差异极显著(PQOl);“*”表示与模型组相比.差异高度显著(PQOOl),下同图2样品对3种炎性因子蛋白的表达量Fig. 2 ExpressionlevelsoftlreeInflaInnlatOlyfactorsmsamples.O5Q5OZLL0. Es米(xi<nxe Xi3S2SSl空白 模型 Sl S2 S32 1 阳均郴玄lVNUE cpAIL-6;B-TNF-图3样品对炎性因子基因的相对表达量Fig. 3 RelativeexpressionlevelofInflanmiatoryfactorgenesmsamplesO20406080100体积分数/%图4Sl、S2、S3对DPPH自由基的清除作用Fig. 4 ScavengingeffectofSI,S2,S3onDPPHfreeradical图5SI、S2、S3对羟基自由基的清除作用Fig. 5 ScavengingeffectofSI,S2,S3onhydroxylradical0 5 0 52 11(XoOU WTOUlUI) <WH“*"表示与Sl相比,差异高度显著（PwOOl）图6SKS2、S3的总抗氧化能力Fig.6TotalantioxidantcapacityofaqueousSI,S2,S38表示与模型组相比.差异显著（P©05）,下同图7Sl、S2、S3的COL-I表达最Fig.7COL-IexpressionlevelofSLS2,S3空白模型SlS2S3图8SI、S2、S3的CAT表达量Fig.8CATexpressionlevelsofSI,S2,S3SlS2S3“*"表示与Sl相比.差异高度显著（POOOl）- O 5%/<®木祖S逑髭族Sg图9SI、S2、S3对酪氨酸施活性的抑制率Fie.9InhibitionrateoftyrosinaseactivitybyS1,S2.S3阳性对氟阴性对照SlS2S3IU10SI.S2.S3作用在缄毛尿费飘前后时比图Fig.IOComParISOnofSI,S2,S3beforeandaftertheactionofCAM去4黄花菜发醵液醇胚绒毛尿囊膜实验结果Table4ExperimentalresultsofHET-CAMindaylilyIennentationbroth阴性对服RitttfWSlS2S3编号出血血管图解编号出血血管凝血血轿融解编号出血血管管做螂«9Him凝血血管电解编号出血也管般*血管融解100.010.011333100050100010002000.01232320002000200.020300033133000300.0503000014000.0143134000.0240004000500.010.01S303$00.040500.030S00.04060006303600060006000ES«004ES-18ES-O09ES三008ES=O06
