细胞培养的一般过程注意事项[1].docx

细胞培养的一般过程注意事项细胞培养：是指将活细胞（尤其是分散的细胞）在体外进行培养的方法。细胞培养的一般过程：一、准备工作准备工作对开展细胞培养异常紧要，工作量也较大，应予以充分的重视，推备工作中某一环节的疏忽可导致试验失败或无法进行。准备工作的内容包含器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试。二、取材在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视试验目的而定），经过肯定的处理（如消化分散细胞、分别等）后接入培养器血中，这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的第一次培养称为原代培养。理论上讲各种动物和人体内的全部组织都可以用于培养，实际上幼体组织（尤其是胚胎组织）比成年个体的组织容易培养，分化程度低的组织比分化高的容易培养，肿瘤组织比正常组织容易培养。取材后应立刻处理，尽快培养，因故不能立刻培养时，可将组织块切成黄豆般大的小块，置4。C的培养液中保管。取组织时应严格保持无菌，同时也要避开接触其他的有害物质。取病理组织和皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌，为减少污染可用抗菌素处理。三、培养将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。如系组织块培养，则直接将组织块接入培养器皿底部，几个小时后组织块可贴牢在底部，再加入培养基。如系细胞培养，一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数，按要求以肯定的量（以每毫升细胞数表示）接入培养器皿并直接加入培养基。细胞进入培养器皿后，立刻放入培养箱中，使细胞尽早进入生长状态。正在培养中的细胞应每隔肯定时间察看一次，察看的内容包含细胞是否生长良好，形态是否正常，有无污染，培养基的PH是否太酸或太碱（由酚红指示剂指示），另外对培养温度和C02浓度也要定时检查。原代培养一般有一段潜匿期（数小时到数十天不等），在潜匿期细胞一般不分裂，但可贴壁和游走。过了潜匿期后细胞进入旺盛的分裂生长期。细胞长满瓶底后要进行传代培养，将一瓶中的细胞消化悬浮后分至两到三瓶连续培养。每传代一次称为“一代”。二倍体细胞一般只能传几十代，而转化细胞系或细胞株则可无限地传代下去。转化细胞可能具有恶性性质，也可能仅有不死性（Immortality）而无恶性。四、冻存及复苏为了保管细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般用液氮的温度一196T,将细胞收集至冻存管中加入含保护剂（一般为二甲亚飒或甘油）的培养基，以肯定的冷却速度冻存，最终保管于液氮中。在极低的温度下，细胞保管的时间将近是无限的。复苏一般采用快融方法，即从液氮中取出冻存管后，立刻放入37。C水中，使之在一分钟内快速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。冻存过程中保护剂的选用、细胞密度、降温速度及复苏时温度、溶化速度等都对细胞活力有影响。五、常用仪器设备无菌室，超净工作台，三重纯水蒸储器,抽气泵,压力蒸气消毒器，电热恒温培养箱，培养器具，C02培养箱，恒温水浴锅，倒置显微镜，离心机，无菌过滤器，洗刷装置，细胞计数板和电子细胞技术仪等等。