组织无机磷含量测定试剂盒说明书.docx

组织无机磷含量测定试剂盒说明书组织无机磷含量测定试剂盒说明书微量法IoOT/96S注意：正式测定之前选择23个预期差别大的样本做猜测定。测定意义：无机磷重要指磷酸根，参加生物体内多种代谢，包含能量代谢、核酸代谢、蛋白质磷酸化和脱磷酸化等等，另外促进碳水化合物的合成、转化和转运。测定原理：铝蓝与磷酸根生成66Onm有特征汲取峰的物质，通过测定66Onm光汲取，即可计算无机磷含量。自备仪器和用品：离心机、水浴锅、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸储水。试剂构成和配置：试剂一：液体IOonILXI瓶，4。C保管。试剂二：液体5mLXl瓶，4。C保管。试剂三：粉剂Xl瓶，4。C避光保管。临用前配制，加入10mL蒸得水，充分溶解后加入试剂二（全部），混匀。标准品：液体Xl支Q无机磷提取：依照组织质量（g）：试剂一体积（mL）为1：510的比例（建议称取约OJg组织，加入InIL试剂一）进行冰浴匀浆。100OOrpm,4离心IOmirb取上清，置冰上待测。测定：1 .分光光度计/酶标仪预热30min,调整波长到660nm,蒸储水调零。2 .打开水浴锅，调整温度到4（C°3 .空白管：取0.5mLEP管，依次加入IoOUL蒸镭水，100UL试剂三，混匀后置于40。C水浴保温IOmin,室温冷却IonIin后于660nm测定吸光度，记为A空白管。4 .标准管：取0.5mLEP管，依次加入10L标准液，90L蒸僧水，100HL试剂三，混匀后置于40。C水浴保温IOmin,室温冷却10min后于660nm测定吸光度，记为A标准管。5 .测定管：取0.5mLEP管，依次加入IORL上清液，90L蒸僧水，100UL试剂三，混匀后置于40。C水浴保温IOmin,室温冷却10min后于660nm测定吸光度，记为A测定管。注意：空白管和标准管只需测定一次。组织无机磷含量计算：（1）依照蛋白含量计算无机磷含量（RInOImgprot）=C标准液X（A测定管一A空白管）÷（A标准管一A空白管）XV总÷Cpr=1×（A测定管一A空白管）÷（A标准管一A空白管）÷Cpr（2）依照样本质量计算无机磷含量（UlnoI/g鲜重）=C标准液X（A测定管一A空白管）÷（A标准管一A空白管）XV总÷W=1×（A测定管一A空白管）÷（A标准管一A空白管）÷WC标准液：Immol/L；V总：上清液总体积，ImL=O.OOlL；W：样品质量，go注意事项：1. 试剂三需临用前配制，而且当天使用完毕。2. 40min内完成比色。3. Z低检出限为10molLo