测定垂盆草总黄酮含量.docx
测定垂盆草总黄酮含量【摘要】目的建立垂盆草中总黄酮含量的测定方法。方法采用紫外分光光度法，测定波长为501nm°结果总黄酮检测浓度在0.010360.08288mgmL范围内与吸光度线性关系良好（厂0.9998）,平均加样回收率为98.62%（RSD=1.11%,n=6）o结论本方法用于垂盆草中总黄酮的含量测定，结果准确、可靠、稳定。【关键词】紫外分光光度法；垂盆草；总黄酮；含量测定垂盆草（SedumsarmentosumBunge）又称卧茎景天，系景天科多年生草本植物垂盆草的新鲜或干燥的全草，我国大部分地区均有分布。该药味甘、淡、性凉，具有清热解毒、利尿消肿、排脓生肌之效，主治丹毒溃疡，小便不利及急、慢性肝炎等。据有关文献报道，垂盆草中含有氟甘、黄酮类、留醇类和三菇类等化合物1,2。潘金火等3,4对垂盆草的保肝降酶活性成分进行了一系列的研究，证明垂盆草中具有保肝降酶作用的活性成分主要存在于H20部分和nBuOH部分（主要含甘类和总黄酮），进而确认其中的总黄酮是垂盆草中保肝降酶的主要活性组分之一。本文采用经典的比色法对垂盆草中的总黄酮含量进行测定，以为其后继的开发利用提供依据。1仪器与试药UV2401型可见紫外分光光度计（日本岛津公司）；bp211D型十万分之一天平（德国赛多利斯公司）；索式提取器等。芦丁对照品（中国药品生物制品检定所,批号:086-9303）；垂盆草（购于安徽省毫州市药材总公司，经南京中医药大学中药鉴定教研室王春根教授鉴定为SedumsarmentosumBunge的干燥全草,粉碎至4060目）；亚硝酸钠、氢氧化钠、硝酸铝、乙醇等为分析纯。2方法与结果2.1对照品溶液的制备精密称取于120下减压干燥至恒重的芦丁对照品10.36mg,置50mL容量瓶中，加80%（体积分数）乙醇35mL超声使之完全溶解，冷却至室温，以80%（体积分数）乙醇稀释至刻度，摇匀，得浓度0.2072mgmL的芦丁对照品溶液，冷藏，备用。2.2供试品溶液的制备精密称取垂盆草药材粉末1.Og,置索氏提取器中，加石油酸（6090）IoomL在85水浴温度条件下回流提取至无色，弃去石油酸,药渣挥干石油酸，再用80%（体积分数）乙醇IOomL在IO（TC水浴温度条件下回流提取6h,冷却后，用80%（体积分数）乙醇定容至100mL,备用。2.3定性鉴别反应2.3.1氨水反应取样品溶液点于滤纸上，将滤纸在氨水上方熏15min,立即置紫外光下观察（254nm）,呈黄绿色荧光斑点。2.3.2三氯化铝反应取样品溶液点于滤纸上，滴加5%（质量分数）三氯化铝甲醇溶液,吹干呈灰黄色，在紫外光下（254nm）观察，呈黄绿色荧光斑点。2. 3.3盐酸-镁粉反应取样品ImL,加少许镁粉，再滴加几滴浓盐酸，水浴加热2min后显红色。3. 4测定波长的选择精密量取对照品溶液3mL和供试品溶液5mL,分别置IOmL容量瓶中，加5%（质量分数）亚硝酸钠溶液0.4mL,混匀，放置6min；加10%（质量分数）硝酸铝溶液0.4mL,放置6过min；加4%（质量分数）氢氧化钠溶液1.0mL,用80%（体积分数）乙醇定容至刻度,摇匀，放置15min,以80%（体积分数）乙醇为空白同法配制空白对照液。在40070Onrn波长处扫描，对照品与供试品溶液显色后均在50InIn左右波长处有最大吸收，故将50Inm作为测定波长。紫外光谱图见图U1 .供试品；2.芦丁对照品；3.阴性对照图1紫外扫描图谱（略）Fig.IUVSpectrum2.5专属性试验取“2.2”项下供试品溶液5mL,置IOmL容量瓶中，加80%（体积分数）乙醇至刻度，以8096（体积分数）乙醇溶液为空白对照液，在40070Onm波长处扫描。未经显色的供试品在50Inm左右波长处基本无吸收，说明此显色方法的专属性较强。紫外扫描光谱见图1。2.6标准曲线的绘制分别精密量取对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.OmL,各置IOmL容量瓶中，分别加80%（体积分数）乙醇至5mL,加入5%亚硝酸钠溶液0.4mL,混匀，静置6min；加入10%（质量分数）硝酸铝溶液0.4mL,摇匀，静置6min,加入4%（质量分数）氢氧化钠溶液1.0mL,再加80%（体积分数）乙醇至刻度，摇匀，放置15min,以80%（体积分数）乙醇为空白同法配制空白对照液。分别于50Innl波长处测定吸光度，以吸光度值（八）对质量浓度（P）进行线性回归，得回归方程P=0.0865A+0.0012（r=0.9998）。结果表明，芦丁检测浓度在0.01036-0.08288mgmL范围内线形关系良好。2.7精密度试验取“2.1”项下对照品溶液5mL,置25mL容量瓶中，按“2.4”项下的方法显色，于50Inrn波长处测吸光度5次。结果，吸光度平均值为0.4616,RSD=I.94%,表明该方法精密度良好。2.8稳定性试验取“22”项下供试品溶液5mL,置IOmL容量瓶中,按“2.4”项下的方法显色，于0、20、40、60、80、100、12Omin时测定吸光度。结果RSD=LI6%。表明样品显色后120min内稳定性良好。2.9重现性试验取药材样品LOg,共6份，精密称定，按“2.2”项下方法制备各供试品溶液，各取5mL再按“2.4”项下的方法显色，于50Innl波长处测定吸光度。按标准曲线法计算，结果，总黄酮的平均含量为1.21%,RSD=I.67%,表明本方法重现性良好。2.10加样回收率试验精密称取于120下减压干燥至恒重的芦丁对照品50.86mg,置50mL容量瓶中，加8096（体积分数）乙醇35mL超声使之完全溶解，冷却至室温，以80%（体积分数）乙醇稀释至刻度，摇匀，得浓度1.0172mgmL的芦丁对照品溶液，备用。取垂盆草药材约0.5g,共6份，精密称定，置索氏提取器中，分别加入浓度为1.0172mgL的芦丁对照品溶液6mL,按“2.2”项下方法制备各供试品溶液。取各供试品溶液5mL,再按“2.4”项下的方法显色，于50Inrn波长处测定吸光度，采用随行标准，标准曲线法定量，结果见表1。2.11样品含量测定取3个批号的垂盆草药材约1.0g,每批两份，精密称定，按“22”项下的方法制备各供试品溶液，各取5mL再按“2.4”项下的方法显色，于5（Hnrn波长处测定吸光度。按标准曲线法计算，结果3个批号070101070111070121的总黄酮含量分别为L21%、L24%和1.20%。表1芦丁加样回收率试验（略）Tab.IResultsofrecoverytest3讨论提取总黄酮可采用不同浓度的甲醇、乙醇、丙酮等作溶剂，但黄酮类化合物基本不溶于石油酸5,6,故先用石油酸脱脂，再选用80%（体积分数）乙醇作溶剂，可将黄酮甘和昔元较完全地提取出来，并避免和减少多种水溶性成分的溶出。实验结果表明，在该条件下总黄酮含量较高，为1.22%。垂盆草中黄酮类化合物具有很好的保肝降酶作用，所以垂盆草有很好的开发利用价值。【参考文献】EU国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部s.北京:化学工业出版社，2005.148.2魏太明，阎玉凝，关昕璐，等.垂盆草的化学成分研究ILJ.北京中医药大学学报，2003,26(4)：59-60.3潘金火，何满堂，许惠琴，等.垂盆草中保肝降酶活性组分的筛选LJ.中国药事，2002,16(6):365-366.4潘金火，何满堂，罗兰，等.垂盆草不同提取部位保肝降酶试验J.时珍国医国药,2001,12(10):888-890.5陈晓青，蒋新宇，刘佳佳.中草药成分分离分析技术与方法LM.北京:化学工业出版社，2006：59.6潘金火.垂盆草的化学、药理及其注射液制备工艺和质量标准研究D.南京:南京中医药大学,2000.
