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第七章 球菌一一 生物学性状生物学性状二二 临床意义临床意义三三 微生物学检查法微生物学检查法掌握：掌握：病原性球菌的种类；葡萄球菌、链球菌与奈瑟菌的生病原性球菌的种类；葡萄球菌、链球菌与奈瑟菌的生物学性状、微生物学检验物学性状、微生物学检验革兰氏阳性球菌革兰氏阳性球菌革兰氏阴性球菌革兰氏阴性球菌根据革兰染色的结果根据革兰染色的结果病原性球菌病原性球菌(pathogenic coccus)，又称化脓性球菌，又称化脓性球菌(pyogenic coccus)。主要包括。主要包括葡萄球菌、链球菌、肺葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、炎链球菌、脑膜炎球菌、淋球菌等。脑膜炎球菌、淋球菌等。葡萄球菌、链球菌、四葡萄球菌、链球菌、四联球菌、八叠球菌等联球菌、八叠球菌等奈瑟球菌、布兰汉球菌等奈瑟球菌、布兰汉球菌等球菌球菌Coccus葡萄球菌属 目前有35个种、17个亚种，引起人类疾病的重要菌有金黄色葡萄球菌（S.aureus），表皮葡萄球菌（S.epidermidis），头状葡萄球菌（S.capitis），人葡萄球菌（S.hominis）等。临床常以是否产生凝固酶分为凝固酶阳性和凝固酶阴性葡萄球菌（Coagulase negative staphylococcus,CNS）。根据噬菌体分型，可分成45群26型。利用质粒大小分型、血清学分型、抗生素分型和细菌DNA的RFLP或PFGE分型，用来研究细菌的致病性、耐药性、流行病学特点和细菌鉴别的关系。该属细菌DNA G+C mol%为30%39%。葡萄球菌在人体上的分布葡萄球菌在人体上的分布形态与染色形态与染色培养特性培养特性生化反应生化反应分类分类抵抗力抵抗力初接种时There is nothing on it.2、葡萄球菌的培养特征：、葡萄球菌的培养特征：营养要求不高营养要求不高18-24小时后小时后I can see some small things.They are called colonies.细菌在常见培养基上的生长情况细菌在常见培养基上的生长情况肉汤培养基：肉汤培养基：均匀均匀混浊混浊生生 长长,稍有沉淀稍有沉淀 普通平板：普通平板：形成圆形、隆起、表面光滑、湿润、形成圆形、隆起、表面光滑、湿润、不透明的菌落，不透明的菌落，注意颜色注意颜色血平板：血平板：菌落和溶血情况菌落和溶血情况3、重要的生化反应触酶（+），可与链球菌鉴别葡萄糖、麦芽糖、蔗糖+致病株分解甘露醇（1 1）依据菌落色素、凝固酶、依据菌落色素、凝固酶、A A蛋蛋白等不同性状将葡萄球菌分类白等不同性状将葡萄球菌分类（2 2）根据凝固酶阳性或阴性分类根据凝固酶阳性或阴性分类凝固酶凝固酶阳性阳性的葡萄球菌的葡萄球菌 致病性强致病性强凝固酶凝固酶阴性阴性的葡萄球菌的葡萄球菌 一般无致病性一般无致病性 （3 3）根据噬菌体分型根据噬菌体分型 ：5 5群群2626型型 性状性状 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌表皮葡萄球菌 腐生葡萄球菌腐生葡萄球菌 菌落色素菌落色素 金黄色金黄色 白色白色 白色或柠檬色白色或柠檬色凝固酶凝固酶 +分解葡萄糖分解葡萄糖 +分解甘露醇分解甘露醇 +溶血素溶血素 +耐热核酸酶耐热核酸酶 +A蛋白蛋白 +致病性致病性 强强 弱弱/无无 无无菌落特点：单个菌落菌落特点：单个菌落抵抗力二、致病性致病物质所致疾病（一）致病因素 1.酶类 （1）凝固酶（结合型与游离型）（2）耐热核酸酶 （3）透明质酸酶、磷脂酶 2.毒素 （1）葡萄球菌溶素 （2）肠毒素 （3）毒性休克综合征毒素 （4）杀白细胞素 （5）表皮剥脱毒素（二）所致疾病 1.化脓性疾病 1）皮肤化脓性感染 2）各种器官的化脓性感染 3）全身感染 2.毒素性疾病 1）食物中毒 2）烫伤样皮肤综合征 3）毒素性休克综合征（TSS）4）假膜性肠炎 3.医院感染：凝固酶阴性葡萄球菌是人体皮肤黏膜正常菌群之一。微生物学检验微生物学检验标本采集标本采集直接涂片镜检直接涂片镜检 分离培养分离培养检验程序检验程序鉴定方法鉴定方法检验方法检验方法微生物学检查法微生物学检查法标本标本:不同病种采取不同标本不同病种采取不同标本化脓病灶化脓病灶：脓液、渗出液脓液、渗出液疑为败血症：疑为败血症：血液血液脑膜炎：脑膜炎：脑脊液脑脊液食物中毒：食物中毒：剩余食物、呕吐物和粪便剩余食物、呕吐物和粪便标本采集标本采集检验程序检验方法球菌，0.8m左右大小，葡萄串状排列，革兰氏阳性者可作初步诊断革兰氏染色后镜检革兰氏染色后镜检:细菌的形态、排列、染色性细菌的形态、排列、染色性1.直接涂片镜检直接涂片镜检3.鉴定试验（1）血浆凝固酶试验（2）甘露醇发酵试验（3）耐热核酸酶试验（4）肠毒素的测定（5）SPA检测（1）凝固酶（coagulase)：是鉴定金黄色葡萄球菌的重要标志 当细菌混悬于人或兔血浆时，纤维蛋白原与菌体当细菌混悬于人或兔血浆时，纤维蛋白原与菌体表面的相应受体结合，发生交联而使细菌凝聚。表面的相应受体结合，发生交联而使细菌凝聚。（1）玻片法）玻片法（测（测结合型结合型凝固酶）凝固酶）（2）试管法（测）试管法（测游离型游离型凝固酶）凝固酶）37水浴水浴3-4h后凝固为阳性，后凝固为阳性，24小时不凝固为小时不凝固为阴性阴性药物敏感试验 药物选择A组（常规首选药物）苯唑西林、青霉素；组（临床使用主要药物）阿齐霉素、克林霉素、万古霉素组（对组耐受、过敏或无反应者）环丙沙星、庆大霉素、氯霉素 组（尿道中分离的细菌）诺氟沙星、呋喃妥因。MRS（耐甲氧西林葡萄球菌）筛选:纸片扩散法 配制0.5麦氏单位菌液接种于普通M-H平板，贴1g/片苯唑西林药敏纸片，35，24h观察结果，金黄色葡萄球菌抑菌圈13为敏感，1112为中介，10为耐药，凝固酶阴性葡萄球菌18为敏感，17为耐药（48h观察结果）。1.及时快速鉴定及时快速鉴定2.分出凝固酶阳性菌和阴性菌分出凝固酶阳性菌和阴性菌3.对对MRS的药敏报告的药敏报告copyright 2002概概 述述streptococcus分布广泛分布广泛我的鼻咽部就有我的鼻咽部就有形态：球形或略呈形态：球形或略呈 椭圆形椭圆形大小：大小：0.6-1.0m排列：呈链状排列排列：呈链状排列染色性：染色性：G+形态与染色形态与染色生物学性状生物学性状培养特征培养特征血平板：形成灰白色、圆形、隆起、表面光滑、血平板：形成灰白色、圆形、隆起、表面光滑、半透明或不透明的细小菌落，半透明或不透明的细小菌落，注意溶血环注意溶血环生物学性状生物学性状营养要求高，常用血平板营养要求高，常用血平板血清肉汤培养基，呈血清肉汤培养基，呈沉淀生长沉淀生长甲型溶血性链球菌的溶血情况甲型溶血性链球菌的溶血情况生物学性状生物学性状乙型溶血性链球菌的溶血情况乙型溶血性链球菌的溶血情况生物学性状生物学性状丙型链球菌无溶丙型链球菌无溶 血血生物学性状生物学性状生化反应生化反应链球菌不产生触酶链球菌不产生触酶链球菌不分解菊糖链球菌不分解菊糖,不被胆汁溶解不被胆汁溶解可用来鉴别甲型溶血性链球菌和肺炎球菌可用来鉴别甲型溶血性链球菌和肺炎球菌生物学性状生物学性状可与葡萄球菌鉴别可与葡萄球菌鉴别分分 类类1 1、根据、根据溶血能力溶血能力分类分类甲、乙、丙型溶血性链球菌三类甲、乙、丙型溶血性链球菌三类2 2、根据抗原结构分类：、根据抗原结构分类：根据根据细胞壁细胞壁C抗抗原（多糖抗原）原（多糖抗原）不同而分为不同而分为20个群个群A、B、C、DU、V(无无I、J）群群生物学性状生物学性状抵抗力不强。抵抗力不强。对对青霉素青霉素、红霉素、四环素、磺胺敏感，、红霉素、四环素、磺胺敏感，但目前但目前耐药情况严重耐药情况严重抵抗力抵抗力四、微生物学检验四、微生物学检验标本采集标本采集直接涂片镜检直接涂片镜检 分离培养分离培养检验程序检验程序鉴定方法鉴定方法检验方法检验方法微生物学检查法微生物学检查法标本标本:不同病种采取不同标本不同病种采取不同标本化脓病灶化脓病灶：脓液、渗出液脓液、渗出液疑为败血症：疑为败血症：血液血液鼻咽部：鼻咽部：拭子拭子风湿热：风湿热：血清抗链血清抗链O检测检测标本采集标本采集检验方法球菌，0.5-1.0m左右大小，链状排列，革兰氏阳性者可作初步诊断革兰氏染色后镜检革兰氏染色后镜检:细菌的形态、排列、染色性细菌的形态、排列、染色性1.直接涂片镜检直接涂片镜检3.鉴定试验 溶血链球菌的鉴定（1）杆菌肽敏感试验（2）Lancefield群特异性抗原鉴定（3）试验（4）试验（5）试验3.鉴定试验 非 溶血链球菌的鉴定（1）胆汁溶菌试验（2）Optochin敏感试验（3）胆盐七叶苷试验3.鉴定试验 草绿色链球菌的鉴定 一般鉴定到群检验程序药物敏感试验 药物选择A组：红霉素、青霉素、SMZ B组：头孢吡肟、头孢噻肟、氧氟沙星、培南类 C组：阿莫西林、头孢呋辛、氯霉素、利福平等1.溶血链球菌为毒力强的致病菌应及时报告。溶血链球菌为毒力强的致病菌应及时报告。2.咽部化脓性链球菌易引起并发症，及时报告尽早咽部化脓性链球菌易引起并发症，及时报告尽早用药用药3.注意其他链球菌的报告注意其他链球菌的报告S.pneumoniae概 述一、临床意义一、临床意义二、生物学性状二、生物学性状三、检验程序三、检验程序四、药敏试验四、药敏试验五、检验结果的分析与报告五、检验结果的分析与报告临床意义临床意义分布在正常人的鼻咽部分布在正常人的鼻咽部免疫力下降免疫力下降时出现感染时出现感染感染多发生于儿童感染多发生于儿童以以肺部感染肺部感染为主，多引起为主，多引起大叶性肺炎，若治疗不及大叶性肺炎，若治疗不及时可继发胸膜炎、脓胸、时可继发胸膜炎、脓胸、脑膜炎和败血症脑膜炎和败血症 生物学性状形态与染色：形态与染色：G G+球菌球菌,矛头矛头状状,成双排列，宽端相对成双排列，宽端相对，尖端向外，尖端向外,有荚膜有荚膜 生物学性状 培养特性：营养要求营养要求高，兼性厌氧。初次分离需高，兼性厌氧。初次分离需提供提供5%-10%5%-10%的的COCO2 2。18-24h后血平板上形后血平板上形成灰白色、圆形、针成灰白色、圆形、针尖样的菌落。菌落周尖样的菌落。菌落周围有草绿色溶血环。围有草绿色溶血环。生物学性状培养特性：培养特性：培养培养48h48h后，菌落有自溶现象，后，菌落有自溶现象，菌落的中心会出现凹菌落的中心会出现凹陷，像陷，像“肚脐肚脐”称脐称脐状凹陷。状凹陷。生物学性状主要生化反应 optochin试验试验:含含5g optochin 纸片贴于纸片贴于 涂布有涂布有待测菌的平板上待测菌的平板上35孵育孵育过夜，抑菌圈大于过夜，抑菌圈大于14mm即即为敏感。为敏感。甲型溶血链球菌甲型溶血链球菌(R)肺炎链球菌肺炎链球菌(S)药敏试验药敏试验最后鉴定最后鉴定 发出最终报告发出最终报告初步鉴定初步鉴定菌落特征、菌体形态菌落特征、菌体形态直接涂片革兰染色直接涂片革兰染色鉴定试验鉴定试验痰、脑脊液、胸腹水、脓液痰、脑脊液、胸腹水、脓液血平板血平板血液、环境用品血液、环境用品营养肉汤增菌营养肉汤增菌 355%-10%CO218-24h3518-24h第一天第二天第三天检验程序检验程序药物选择：A组 青霉素、红霉素、青霉素、红霉素、SMZSMZB组 头孢吡肟、头孢噻肟、氧氟沙星、培南类头孢吡肟、头孢噻肟、氧氟沙星、培南类C组 阿莫西林、头孢呋辛、氯霉素、利福平阿莫西林、头孢呋辛、氯霉素、利福平药敏试验药敏试验药敏试验药敏试验 PRSP的筛选 耐青霉素的肺炎链球菌耐青霉素的肺炎链球菌 （penicillin resistant penicillin resistant streptococous pneumoniastreptococous pneumonia,PRSPPRSP）1 1g g苯唑西林抑菌圈苯唑西林抑菌圈20mm20mm或或MICMIC0.6 0.6 g/mlg/ml为为PRSPPRSP 检验结果分析与报告Enterococcus 肠球菌属原来归类链球菌属 Schleifer和Kilpper-Balz1