细胞质RNA提取实验.docx

细胞质RNA提取实验材料与仪器RNAPBS细胞裂解液SDS蛋白酶K酚氯仿异戊醇无水乙醉离心机培养箱步骤1 .对于单层培养细胞(1)每IoCm培养皿培养的细胞，用冰冷PBS洗涤3次。(2)每次ImI然后用小体积PBS刮下细胞，转移至冰浴的离心管中。(3) 300g离心5min,弃上清，继续冰浴。2 .对于悬浮培养细胞(1) 300g离心5min,弃上请。(2)细胞以1/2原体积的冰冷重悬，再离心后弃上清。3 .重悬细胞于375l冰冷的细胞裂解缓冲液，并置冰浴5min。4.于4在微量离心机中离心2111访,将上清移至一个洁净的已加有5m20%0口$的管中，立即在旋涡混合器上振荡。5 .加入2.5l20mg/ml蛋白酶K,37°C温育15min。6 .加入400l酚/氯仿/异戊醇抽提，在旋涡混合器上振荡用微量离心机离心，上清移至干净的离心管中，重复抽提1遍。7 .再以400l氯仿/异戊醇抽槐，上层水相转移至干净的离心管中。8 .加入40l3moll乙酸钠缓冲液(pH7.5),再加无水乙醇，混匀后在干冰/乙醇中沉淀1530min或20过夜。9 .用微量离心机4离心15min加入1ml75%乙醇/25%0.1mol/1乙酸钠(pH5.2)冼涤沉淀。10 .干燥后用100l处理过的水重溶沉淀，取10lRNA稀释于ImI水中，测A280和A260,其与的RNA可在70贮存。