醋酸纤维膜电泳1.ppt

醋酸纤维薄膜电泳实验操作指南JY-SP7型醋酸纤维膜电泳槽(780元）双桥结构，配置三根铂金丝，有循环冷却用规格尺寸：225050(mm)可做各种纸电泳、醋酸纤维膜、载玻片等 电泳适用于临床检验、高校教学、科研等领域材料和试剂n染色液：丽春红S（猩红）：1.6g三氯醋酸：12.0g蒸馏水：200mln漂洗液：(分三盒装)95%乙醇：450ml冰醋酸：50ml蒸馏水：500mln镊子两把n方饭盒一个n长饭盒四个n铅笔、直尺、剪刀、纱布n蒸馏水n摇床（可选）n搅棒或磁力搅拌器n锥形瓶或烧杯n量筒（1000、250和100ml）n玻璃片（1厘米宽、1毫米厚）n微量移液器n吸水纸n封口膜醋酸纤维膜的取用（1）1n用干净镊子从封口袋中夹出醋酸纤维硬膜，待硬膜露出2/3时进入下一步。醋酸纤维膜的取用（2）2n镊子转为夹取膜的短边，将膜取出。转入下一步。醋酸纤维膜的浸润（1）3n将膜的光面向下，使膜浮在缓冲液面上。n注意：不要将膜直接插入缓冲液面下。醋酸纤维膜的浸润（2）4n缓冲液就会自膜的边缘逐渐渗透。醋酸纤维膜的浸润（3）5n直至膜全部均匀润湿。醋酸纤维膜的裁剪（1）6n用干净镊子取出全部均匀润湿的膜，用干净剪刀在暗面的“左上方”剪角。n（这样便于在后续的操作中确定膜的反正面。）醋酸纤维膜的裁剪（2）7n如果只做一个样品，可以从膜上剪取一条。醋酸纤维膜的加样（1）8n用吸水纸吸干膜表面的缓冲液。n（加样处若不吸干的话，样品会随膜表面的缓冲液不定向漂移，造成实验结果不理想）醋酸纤维膜的加样（2）9n吸干表面的缓冲液时，若发现膜内出现干燥时（部分区域变白），应将膜放回缓冲液中润湿均匀后再吸干表面的缓冲液。醋酸纤维膜的加样（3）10n用铅笔在暗面距离上方1cm左右轻轻划线，根据上样量决定划线长度。n（一般是1.5cm，宽度不超过4mm）醋酸纤维膜的加样（4）11n将样品用微量移液器点在封口膜或塑料膜的表面形成液滴。醋酸纤维膜的加样（5）12n用宽度为1cm、厚度为1-1.5mm，具有一定长度的玻璃片作为点样工具，用其平整的边缘蘸取样品。醋酸纤维膜的加样（6）n一手用干净镊子按住膜片，另一只手拿着蘸取样品的玻璃片“印盖”在加样线上。13醋酸纤维膜的加样（7）n可以调节膜片的角度使样品均匀分布于样品线内。14醋酸纤维膜的电泳（1）n将加好样的膜片架在电泳槽的调节杆上，加样端靠近负极。15醋酸纤维膜的电泳（2）n在膜片的两端加盖双层纱布，去除纱布间的气泡，使正、负极缓冲液可通过膜片得以连接。16醋酸纤维膜的电泳（3）n以恒定电流进行电泳。n中压电泳仪n电流大小按所有膜的宽度之和进行计算：常用0.5毫安/厘米。17醋酸纤维膜的电泳（4）n左图是一张9(1.56)厘米宽的膜被分成6条膜片。n所以恒定电流应设为：5mA 或4mA(90.5=4.5mA)18膜宽1.5cm醋酸纤维膜的电泳（5）n样品中加入0.05%(g/ml)溴酚蓝，便于在电泳过程中判断样品泳动状况。19醋酸纤维膜的染色、脱色20（染色、脱色时均可用摇床，用我厂的JY15B型时可选最大频率。）n电泳完毕，将纤维膜浸入染色液中3分钟。n然后放入第一盒漂洗液中5分钟n再移至第二、第三盒漂洗液中。直至蛋白呈红色，背景无色为止。醋酸纤维膜电泳结果21稀释5倍的小牛血清恒定电流5mA电泳半小时染色、脱色的结果。故障分析（1）n在浸泡膜的时候由于缓冲液直接到达了暗面的内部，致使越过的地方不易润湿。n解决办法：解决办法：以膜的光面向下，使膜浮在液面上。22故障分析（2）n加样时膜片已经干燥，上样后，在纱布导引的缓冲液不均匀受力造成。n解决办法：解决办法：加样时若膜片已经干燥，请重新润湿均匀。23故障分析（3）n加样处若不吸干膜表面的缓冲液，样品会不定向漂移，造成实验结果不理想。n解决办法：解决办法：用吸水纸吸干膜表面的缓冲液。.24故障分析（4）n加样处若不吸干膜表面的缓冲液，样品会不定向漂移，造成实验结果不理想。n解决办法：解决办法：用吸水纸吸干膜表面的缓冲液。25故障分析（5）n右侧的膜电泳时间较短n右侧的膜左数2、4泳道由于不溶颗粒物的影响而“拖尾”。可通过上样前对样品进行瞬时离心得以解决。26故障分析（6）n在膜上用铅笔勾划样品线时，若划破膜，就会形成图中右下角膜上的锯齿状条带。n解决办法：解决办法：笔尖要光滑，用力要均匀适中。27建议配套使用君意的电泳仪建议配套使用君意的电泳仪 没有好的稳定的电泳仪，电泳槽很难跑出好的电泳谱带。君意电泳没有好的稳定的电泳仪，电泳槽很难跑出好的电泳谱带。君意电泳仪以极其优异稳定的性能，确保每一个电泳槽能跑出精度高，条带直，仪以极其优异稳定的性能，确保每一个电泳槽能跑出精度高，条带直，分离效果很清晰的电泳谱带。分离效果很清晰的电泳谱带。特别注意电泳仪的选择的适配性SP7醋酸纤维膜电泳槽当带有的载玻片数量较少时，启动时的电压或电流极低，对电泳仪的要求较高。用国产的其他电泳仪或是某些国外的电泳仪常常造成“嘟嘟”的报警。君意电泳公司凭借雄厚的专业技术，专门研制出用于超低电压专用的电泳仪，其型号分别是JY-600+和Jy-200C。该电泳仪经过北大、清华老师试用在国内，国外各类超低电压启动的醋酸纤维膜电泳槽和干转槽中，性能非常稳定。尤其JY600+电泳仪，不但可用于极低电压的醋酸纤维膜槽干转槽，而且在用于其它水平槽的特殊实验如只带一个载玻片实验时，启动电压只为0。1伏，老师试用了国内，外所有电泳仪都不行，但使用君意600+电泳仪后，电流电压性能非常稳定，实验结果很理想。谢 谢！