荧光法测定维生素B2.ppt

荧光法测定维生素荧光法测定维生素B2实验实验3-4一一 实验目的实验目的1.学习选择荧光激发和发射波长的方法学习选择荧光激发和发射波长的方法2.掌握荧光定量分析方法掌握荧光定量分析方法3.掌握荧光光度计的基本构造和使用方法掌握荧光光度计的基本构造和使用方法二二 实验原理实验原理1 激发光谱与发射光谱激发光谱与发射光谱nkShSa 0(激发激发)(hS0荧光荧光 1SSn振动弛豫，内转换振动弛豫，内转换系间窜跃系间窜跃kf1T相对强度相对强度萘的激发和荧光光谱萘的激发和荧光光谱激发光谱激发光谱荧光光谱荧光光谱2 定量分析方法定量分析方法If=2.3 I0 l c =Kc l c 0.05，If与与c方呈线性关系方呈线性关系三三 荧光光度计荧光光度计光光源源第一第一单色器单色器第二第二单色器单色器激激发发荧光荧光样品池样品池检测系统检测系统荧光光度计示意图荧光光度计示意图2 分光系统分光系统(双单色器双单色器)第一单色器作用：选择激发波长第一单色器作用：选择激发波长第二单色器作用：分离出荧光发射波长第二单色器作用：分离出荧光发射波长1 光源光源氙弧灯：氙弧灯：250-800 nm连续光谱连续光谱高压汞灯：线光谱高压汞灯：线光谱3 样品池样品池 四面透光四面透光4 检测器检测器 光电倍增管光电倍增管四四 实验步骤实验步骤1.绘制维生素绘制维生素B2B2的激发光谱与发射光谱的激发光谱与发射光谱200300400500600700800510152025303540激发光谱激发光谱发射光谱发射光谱2.维生素维生素B2B2标准曲线的测定标准曲线的测定相对荧光强度相对荧光强度C维生素维生素B2xxxxx3.水样中维生素水样中维生素B2B2含量的测定含量的测定200300400500600700800510152025303540