胚胎工程上课稿.ppt

胚胎移植技术第一节 胚胎移植l胚胎移植的概念l胚胎移植的发展历史l胚胎移植的意义l胚胎移植的生理学基础和基本原则l胚胎移植的技术程序胚胎移植的概念l胚胎移植：就是将良种母畜的早期胚胎取出（或者是由体外受精及其他方式获得的胚胎），移植到同种的生理状态相同的母畜体内，使之继续发育成为新个体。l供体：提供胚胎的母畜称为供体。l受体：接受胚胎的母畜称为受体。胚胎移植的发展历史l人们研究胚胎移植已有一百多年的历史。英国剑桥大学的alter Heape 1890年首次在家兔成功。l胚胎移植在家畜上的实验最早是20世纪30年代。绵羊（1934）、山羊（1949）、猪（1951）、牛（1951）、和马（1970）都相继获得胚胎移植个体。l我国胚胎移植始于1964年，到20世纪70年代后期我国开始将胚胎移植应用到畜牧业上，并在绵羊（1974）、牛（1978）等家畜上相继获得成功，并逐步在生产上推广应用。胚胎移植的意义l胚胎移植充分发挥优秀母畜的繁殖潜力。l胚胎移植是家畜育种的重要手段。l胚胎移植技术可提高肉畜的双胎率。l胚胎移植可代替种畜的引进。l胚胎移植可用于保存品种、物种资源。l胚胎移植防止疫病克服不孕。l胚胎移植是研究其它配子、胚胎工程技术的基础环节。胚胎移植的生物学基础l母畜发情后生殖器官的孕向发育l早期胚胎的游离状态l胚胎移植与免疫排斥的影响l胚胎的遗传特性胚胎移植的基本原则l胚胎移植前后所处环境的同一性供体和受体在分类学上的相同属性（即同一物种）生理上的一致性（即同一时间发情）解剖部位的一致性（空间环境相似）l胚胎收集的期限在受体母畜周期黄体退化之前进行，通常在供体发情配种后38天内收集。l胚胎质量的保证在移植全过程中，胚胎不应受到任何不良因素的影响而降低生活力胚胎移植的技术程序l供体和受体的准备l供体超数排卵处理l供体的配种l胚胎的收集l胚胎的检查l胚胎的培养和保存l胚胎的移植供体和受体的准备l供体的选择：必须是健康、具有较高的育种价值、生殖机能正常、对超排反应好的母畜。l受体的选择：可选本地品种，每头供体需要准备多头受体，要健康、繁殖性能良好，体型在中等以上。l供体、受体的同期发情：发情时间相差不超过一天。供体超数排卵处理l意义：每个供体提供更多的胚胎l处理时间：牛：预计自然发情时间的前4天，或发情周期的第9-13天,应用FSH+PG处理。羊：发情周期的第12-13天，应用FSH+PG处理。例：羊的同期发情及超数排卵的程序（如下表）羊的同期发情及超数排卵的程序日期（天）日期（天）供供 体体受受 体体0放栓放栓1-89早晚两次注射FSH、相隔12t；10早晚两次注射FSH，相隔12t；晚：同时注射Pg0.8-0.9ml11早晚两次注射FSH、相隔12t；早：同时注射PG0.8-0.9ml；晚：同时取栓取栓12试情、发情；注射PG0.8-0.9ml；第1次AI，12t后第2次AI试情、发情观察、记录13第3次AI空腹14空腹15输卵管冲胚移植16早晚两次青霉素注射200万单位早晚两次青霉素注射200万单位17早晚两次青霉素注射200万单位早晚两次青霉素注射200万单位18早晚两次青霉素注射200万单位早晚两次青霉素注射200万单位19-2021供体的配种l本交：必须用优秀的种公畜进行多次配种，一般隔8-12小时进行一次配种，直到发情结束。l人工授精：配种前应对种公畜的精液进行质量检查，需要精液密度大，活力高的精液输精。l注：可优秀种公畜不足时，考虑首次采用本交，以后采用人工授精，也可以全部采用人工授精。胚胎的收集l手术法：适合所有家畜胚胎在输卵管内l牛、羊、兔适用于上行法（图1）l猪、马适用于下行法（图2）胚胎在子宫角内（图3）l非手术法：适合于大家畜而且胚胎在子宫角内二路导管法三路导管法（图4）l冲洗液：多采用杜氏磷酸盐缓冲液（PBS）手术取胚的三种方法非手术取胚的方法胚胎的检查l将收集到的冲卵液静置10分钟，等胚胎下沉后移去上层液，直接或吸取底部液体，置于实体显微镜下，在25-37的恒温条件下进行检查。二至四个细胞正常胚胎示意图正常胚胎示意图胚胎的培养和保存l常温短期保存（在15-25条件下）l低温保存（0-5条件下）l冷冻保存（-80以下）胚胎装管示意图胚胎装管示意图胚胎的移植l手术法：适合所有家畜l非手术法：只适合大家畜（方法与输精相同只是部位深）l原则：胚胎收集与移植的部位一致；且移植到有黄体一侧的子宫角或输卵管内。供体和受体的术后观察l术后的供体和受体连续三天、每天两次注射青、链霉素。l受体分群饲养l受体进行妊娠检查l加强营养水平