液相色谱法的原理.docx

液相色谱法的原理一、液相色谱定量分析原理在定性的基础上定量，需有纯物质作为标准物；液相色谱定量是相对定量的方法：即由已知量的纯标样推算混合物中被测物的量二、液相色谱法定量的依据被测组分的量(W)与响应值（八）(峰高或峰面积)成正比，W=f×Ao定量校正因子：是定量计算公式的比例常数，其物理意义时单位响应值(峰面积)所代表的被测组分的量。由已知标准样品的量和其响应值可以求得定量校正因子。测定未知组分的响应值，通过定量校正因子即可求得该组分的量。三、定量分析常用术语样品(sample)：含有带测物，供色谱分析的溶液。分为标样和未知样。标样(Standard)：浓度已知的纯品。未知样(unknow)：浓度待测的混合物。样品量(SampIeweight):待测样品的原始称样量。稀释度(dilution)：未知样的稀释倍数。组分(componance)：欲做定量分析的色谱峰，即含量未知的被测物。组分的量(amount)：被测物质的含量(或浓度)。积分(integerity)：由计算机对色谱峰进行的峰面积测量的计算过程。校正曲线(CaIibrationCUrve)：组分含量对响应值的线性曲线，由已知量的标准物建立，用于测定待测物的未知含量。四、液相色谱定量分析的步骤1、选择一个适合定量分析的色谱方法：I确认被检测组分峰，并达到分离度(R)大于1.5I确定被测组分色谱峰的一致性(纯度)I确定方法的检测限及定量限；灵敏度及线性范围2、用不同浓度的标准样品建立校正曲线3、考查定量方法的准确度及精密度4、用相应的色谱管理软件实施样品采集，数据处理及报告结果五、标准曲线法，分为外标法和内标法:1、外标法：在液相色谱中用得最多用被测化合物的纯品作为标准样品，配制成一系列的已知浓度的标样。注入色谱柱的到其响应值（峰面积）。在一定范围内，标样的浓度与响应值之间存在较好的线性关系，即W=fXA,制成标准曲线。在完全相同的实验条件下，注入未知样品，得到欲测组分的响应值。根据已知的系数3即可求出欲测组分的浓度。外标法的优点：操作、计算简单，是一种常用的定量方法；无需各组分都被检出、洗脱；需要标样：标样及未知样品的测定条件要一致：进样体积要准确。外标法缺点：实验条件要求高，如检测器的灵敏度，流速、流动相组成的不能发生变化；每次进样体积要有好的重复性。2、内标法：准确，但是麻烦，在标准方法中用得最多将已知量的内标样加入标准样品，制成混合标样，并配制一系列的已知浓度的工作标样。混合标样中标样与内标样的摩尔比不变。注入色谱柱，以（标样峰面积/内标样峰面积）为响应值。根据响应值与工作标样浓度之间存在的线性关系，即W=fXA,制成标准曲线。将已知量的内标样加入未知样品，注入色谱柱，得到欲测组分的响应值。根据已知的系数f,即可求出欲测组分的浓度。内标法的特点：操作过程中样品和内标是混合在一起注入色谱柱的，因此只要混合溶液中被测组分与内标的量的比值恒定，上样体积的变化不会影响影响定量结果。内标法抵消了上样体积，乃至流动相、检测器的影响，因此比外标法精确。