发育生物学——发育生物学研究技术.ppt

1过大随机诱变,产生发育异常的突变个体,再寻找突变基因通过大规模随机诱变,产生发育异常的突变个体,再寻找突变基因。正向遗传学技术正向一、正向遗传学技术正向遗传学定律（仿Slack J., 2001）aaa其它基因型个体T T aaaaF1代雄性个体平衡染色体纯合致死温度敏感性致死存活个体雌雄个体间交配平衡染色体纯合致死平衡的储备品系纯合突变体（同时出现a表型）平衡染色体P：F1:F2:F3:（化学诱变）Constructing knockout mice获得携带有特定基因获得携带有特定基因突变个体的技术，研突变个体的技术，研究基因在发育中功能究基因在发育中功能的重要方法。的重要方法。1) 1) 构建用于基因重构建用于基因重组的突变基因结构组的突变基因结构2) 2) 重组基因导入胚重组基因导入胚胎干细胞胎干细胞 (ES)(ES)3) 3) 注射注射ESES入胚胎中入胚胎中以获得杂合性小鼠以获得杂合性小鼠4) 4) 小鼠杂交获得纯小鼠杂交获得纯合体小鼠并进行表型合体小鼠并进行表型分析。分析。Conditional knockout仅使靶基因在特定的组织或仅使靶基因在特定的组织或发育时期失活。发育时期失活。Cre-lox 系系统统 1) Cre编码一种重组酶，可编码一种重组酶，可识别并结合位点并切除位于识别并结合位点并切除位于两个两个LoxP 位点之间的序列位点之间的序列。2) 两个品系：靶基因两侧都两个品系：靶基因两侧都加入加入LoxP 位点位点; 转入由组织转入由组织特异性启动子控制的特异性启动子控制的cre基基因因3) 小鼠杂交，小鼠杂交， cre基因会在基因会在特异性组织中表达，切除靶特异性组织中表达，切除靶基因，使之失活。基因，使之失活。Transgenic technique1) 将外源基因注射到受将外源基因注射到受精卵的细胞核中，精卵的细胞核中， 缺点缺点是无法控制外源基因的是无法控制外源基因的插入情况，插入情况， 只能通过后只能通过后代检查代检查DNA。2) 将外源基因转化到将外源基因转化到ES中，同中，同gene knockout3) 小鼠杂交。小鼠杂交。RNAi 技术技术1) 双链双链RNA抑制含抑制含其同源序列基因的表其同源序列基因的表达，抑制基因表达的达，抑制基因表达的新方法新方法2) 线虫中：直接导入线虫中：直接导入dsRNA; 脊椎动物中脊椎动物中siRNA (21-23 nt)