3D培养与肿瘤微环境培养要点实例分析.docx

3D培养与肿瘤微环境培养要点实例分析肿瘤微环境肿瘤微环境(tumormicroenvironment,TME)，为肿瘤细胞生存场所，是一个动态复杂的网络。实体瘤的环境中包含：肿瘤细胞、肿瘤周围和内部聚集的大量免疫细胞、肿瘤血管、内皮细胞、成纤维细胞、细胞外基质和间质组织等，这些都是影响肿瘤转移的关键因素。近几年越来越多的研究发现，肿瘤微环境中的多细胞组成，往往会决定对某种特定疗法的影响，进而决定癌症治疗的成败。3D培养与肿瘤微环境3D培养体系已成为体外研究复杂系统(如TME)的标准,可以通过这些体系深入了解体内发生的细胞-细胞相互作用和通信。在构建体外3D共培养体系时，这些肿瘤相关细胞,常用于建立3D肿瘤球模型，将两种或是两种以上多细胞混合，探讨不同细胞和肿瘤球的相互作用。常见3D培养模型的肿瘤细胞有：乳腺癌、胰腺癌、肺癌、肝癌、甲状腺癌等类型的实体瘤细胞系。传统的3D培养系统，一般使用EHS小鼠肉瘤提取物，但由于其成分复杂(含有影响研究的生长因子或蛋白质)，具有批间差，对温度控制要求较高，可再现性差，在操作和应用上仍存在局限性。因此需要可再现的体系，可以扩展体系的复杂性，并结合多种细胞类型揭示细胞-细胞相互作用/信号传导机制。Vitrogel3D水凝胶体系，为无动物源性多糖水凝胶，成分单一且明确，可再现性高，操作便捷，可在细胞培养后轻松收获细胞，可更好模拟TME,了解如何抑制甚至逆转侵袭性癌症的恶性表型。胰腺癌细胞TME实例TitrogeI3D培养VitroGel3D水凝胶体系已经用于多个细胞系的持续培养，包括最近用于胰腺癌细胞(PANe-I)的研究。美国TheWell公司近期发表了PANCT的应用指南。结果显示，该水凝胶体系在检测细胞成球大小和肌动蛋白定位时，可以获得稳定的PANe-I3D细胞球模型。以下细胞萤光染色图是验证这个系统的初步实验结果，该系统现阶段可以呈指数形式扩增，并可应用于后续的分析和药物筛选研究。PANC-I细胞在水凝胶中培养七天后，进行荧光染色共聚焦显微镜观察（激光扫描水凝胶中细胞的XYZ面,影像叠加而成的肿瘤球模型）VitroGeIIM水凝胶系统离子成胶型水凝胶，可调节软硬度，模仿天然细胞外基质环境，在室温操作使用。可用于2D凝胶培养、3D培养及动物注射，为体内外研究提供共通的操作平台。