概述霍乱弧菌检测的检查过程.docx

概述霍乱弧菌检测的检查过程一.采样1 .腹泻患者样本采集：水样便采l3ml,成形便取指甲大小量；肛拭子：生理盐水浸湿采便管由肛门插入直肠内35cm处旋转取出；呕吐物采3mlo2 .水样及液体标本采相对静止表层水（30CnI内）500ml,其他液体标本采集500ml,23小时内送检。3 .10-15只苍蝇作为一份标本。4.涂抹样本采集23支无菌棉签涂抹35只以上水生动物表面、腮部及泄殖腔。23支无菌棉签涂抹食品或物品表面（地沟口，下水管口，水池壁涂抹，餐盘内外侧），直接放入IOnIl碱陈水送检。二、动力及动力抑制试验。三、碱性蛋白陈水（APW）增菌粪便、呕吐物、肛拭子与APW比例1：5,碱豚增菌同时接种庆大培养基；必要时可二次增菌；取菌膜下表层培养物010.2mL转种于IOnIL碱性腺水管中作二次增菌；第一次增菌37。C培养6h8h,第二次增菌37。C培养6h8h.各种涂抹标本碱豚增菌同时接种庆大培养基；必要时可二次增菌；取菌膜下表层培养物0102mL转种于IOnIL碱性陈水管中作二次增菌；一次增菌376-8h,二次增菌37°C6-8h.水样和其他液体标本十倍浓缩碱陈增菌法：取450mL(调pH8.8-9.0)+50mL10×APW;37培养(6-8h)；必要时可二次增菌。苍蝇标本研磨后全部于IonIL碱性腺水管中充分混匀37。C培养(6-8h)o四、取增菌液表面下的液体，划线接种庆大平板37温箱培养18-24h°五、血清学检查增菌接种庆大平板培养24小时后玻片凝集。凝集现象10-15秒可出现凝集，一分钟内不出现凝集者，为阴性。做9-10个单菌落。注意弱凝集现象；小川稻叶均凝集时做试管凝集。如果凝集颗粒不好，取盐水加菌两个互相对照一起看。六、分纯：用接种环取抗原抗体复合物接种于普通营养琼脂板上分纯，37。C过夜培养七、氧化酶试验和菌种保存取营养琼脂上菌落涂抹于有试剂的滤纸上，在30秒-1分钟内出现紫蓝色均为阳性；不变色或出现浅粉红后很快褪色，均为阴性。用接种针取单个菌落穿刺半固体培养基。