《乳与乳制品金黄色葡萄球菌定性检测 Petrifilm测试片法》.docx

ICSXXXAXXX团体标准T/CIQAx-xxxx乳与乳制品金黄色葡萄球菌定性检测PetrifiIm测试片法Qua1.iiativcdetectionofStaphy1.ococcusaureusinmi1.kanddairy111.uctsPetrifi1.mMethod（征求意见稿-草案）XXXXXX-XX实施XXXXXXXX发布中国出入境检验检疫协会发布前言本文件按照（；B/TI.1.-20204标准化工作导则第I部分：标准化文件的结构和起草规则T的规定起坏。请注意本文件的某线内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承也识别这些专利的货仔.本文件由中国出入境检验检疫协会进HiiI色品标准化技术委员会（CIQTC）提出并归门.本文件起草单位：中国海关科学技术研究中心、内蒙古伊利实业集团股份行限公E、内蒙古蒙牛乳业（集团）股份才f限公司、北京三元食都股份有限公司、河北三元食品有限公司、新希里乳业股份有限公司、纽勃生物科技（上海）有限公司。本文件主要起草人：赵晓姐、王易、李惠君、孙英明、途刚、喻东威、张双、杨宇、赵理、孙妹、夏忠悦、宋艳梅、王航、于宝军、张洪沂本文件知识产权归中国出入境检验检疫协会所有。任何单位或个人未经许可，不得以甘利为目的,印制、出版、翎译、游发或复制全文或部分文字。乳与乳制品金黄色葡萄球菌定性检测PetrifiIm测试片法1范囹本文件规定了乳及乳制品中金黄色锚菌麻菌定性检验方法.本文件适用于孔及乳制品中金黄色球曲的定性检蛤，2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件.仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单适用于本文件.GB19489实骁室生物安全通用要求GB4789.18食品安全国家标准食品微生物学检脸乳及孔制品检脸GB/T6682分析实验室用水规格和试5金方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4技术要求4.1 方法提要佥黄色简的球甫PetrifiIM测忒片是用一种预先制；的含有指示剂及冷水可溶性凝胶的培养基系统进行微生物培养的方法，含有具有显色功能并经改良的BHird-Parkc培养基，对金黄色制为琢菌具有很强的选择性.金黄色前的球菌在测试片上呈现紫红色菌落.若出现除紫纣色以外的其他颜色的菌落，则应使用含有显色剂和酸氧核标核酸（DNA）的金黄色葩荷球菌确认片（PetrifiImStaPhEXDreSSDiSk）,进行进一步确认。金黄色郁劭球苗会产生的脱乳核铺核酸解（DNasc）,该例与确认片中的DNA作用使金黄色刘国球的阳落呈现粉红色晕圈。4.2 设备和材料除微生物实3金室常规灭阳和培养设备外，其他设备和材料如M4.2.1 恒温培养箱：36C±IC4.2.2 电子天平：博城0.1g。4.2.3 PH计或精密PH试纸.4.2.4 均质潺（拍击式）或等效的设符.4.2.5 旅涡振荡岩.4.2.6 无的移液管：1n1.（具0.（Hm1.刻度）、10九（具0.1三1.刻度）无省移液管或移液器及吸头.4.2.7 接种环：101.4.2.8 无由均顺袋；100m1.,4.2.9 测试片压板。4.3 培养基和试剂实验用水应湎足GB/T6682中三级水的要求4.3.17.5%氯化领|肉汤:见附录A的A.I,商品化培养基按使用说明进行配制.4.3.2无菌生埋盐水：见A.2.4.3.3俄酸盐缓冲液：见A.3.4.3.4Petrifi1.m金黄色优萄球菌测试片（Petrifi1.m1（StaPhExpressCountP1.ate）.4.3.5PetrifiI1.n金英色葡荀球菌确认片（PetrifiIm®StaphExpressDisk）.5榜验程序金黄色偏荀球前定性检验程序见图1.检样25g(m1.)样品225m1.7.5氯化钠肉汤.均质36r11.C118h-24h图I金黄色面箭球|¥1.PetrifiIm定性检验程序6操作步骤6.1 样品前处理乳及乳制品的采样和检样处理参照CB4789.18进行.称取25g样品至盛有225mI75%氯化钠肉汤无的均质袋中，用拍击式均质器拍打Iin2miru若样品为液态，可以在均质袋内预置适当数量的无曲玻璃珠，振荡混匀。样品匀液PH值应为6.57.5,样品匀液PH过低或过高时可采用1bo11.NaOHrfi1.mo1./UIC1.进行调M.6.2 增曲培养将上述样品匀液于36C±1C培养18h24h,金黄色面勘球画在7.5%羔化钠肉汤中呈混浊生长.6.3 分离将6.2的增菌液充分混匀.取一张金黄色简荀球菌测试片，揭开上层腹，用101.的接种环取一环增菌液，划畿接种于测试片培养基上，立刻取1此无甫生理盐水或磷酸盐缓冲液,垂出滴加到测试片培养基中央.将上层统缓慢落下,避免气泡产生.将压板放置在上层中央轻轻压下.使样液均勺粉盘培养,切勿扭转或滑动压板，拿起压板，部置1min以使培养葩凝固.6.4 分离培养将测试片正置于培养箱内.堆登片数不超过20片.36±ir,培养24h±2h.金黄色葡荷球菌在测试片上的典型菌落为紫红色.6.5 非典型菌落的确认如果测试片上出现非紫红色的菌落(例如：黑色或监绿色崩落)为非典型的常，需要用确认片进行确认.符测试片;层膜轼起.将确认片置入测试片的培养基区域.再将上层膜放下覆装在确认片上，粕测试片与确认片压紧贴合，避免产生气泡，置F36C±1C,培养1h3h°若讣典型曲落周用出现粉红色晕圈，可以刊断其为金黄色匐曲球茵茵落.7结果与报告根据6.4和6.5中的典型衡落报告结果.报告25g(m1.)样m中检出或未检出金黄色施萄球露实验室生物安全应满足GB19189的要求.附录A培养基和试剂A.17.5、氯化钠肉汤A.1.1成分蛋白陈10.0g牛肉者5.0g氧化钠75.0蒸慵水1000.0m1.A.1.2制法将上述成分加热溶解,调节PH至7.4±0.2,1214C点压灭Bn5三in.A.2无菌生理盐水A.2.1成分烈化钠8.5g蒸福水100a0m1.A.2.2制法称取8.5g氯化钠溶于1000.0m1.蒸饱水中，12C1压灭菌15m11.A.3绿酸盐缓冲液A.3.1成分助酸二氧钾（KI1.POJ34.0g蒸慵水SOOm1.|>»7.2A.3.2制法贮存液：称取34.0g的磷酸二氢伴溶于500必蒸潮水中,用大的175m1.的1roo1./1.区氧化辆溶液调节pH,用蒸循水桶择至100om1.后贮存于冰箱中.稀柞液：取贮存液1.25U,用蒸馅水稀择至100m1.,分装于适宜容器中，121X:高压灭菌15min«