一种野生芽孢5-HTP转化菌基因工程改造方法.docx

一种基因工程改造野生芽胞菌生产5-势基色我酸的方法及工程菌株技术Q城0001本发明涉及生物技术钝域，特别是涉及种聪因工程改造时生芽抱苗产生5-羟般色M酸的方法及工程赭株W景技术00025-羟基色敏酸(5-HTP)是色红酸氧化后形成的氨场酸衍生物,在大第数欧洲国家，5HTP是用于多种治疗目的的常用的处方药：然而在北美市场中，将它作为“非处方”的席食补充剂销售.00035-HTP还被认为是一种潜在的农场动物的饲料添加剂，在动物生长和生产能力中有积极彰响，0004随着加纳树等资源不断就少，以及人们对绿色环保合成工艺的不断重觇，来用基因工程和代谢工程方法,改造工程菌.获得5粕基色以酸.逐渐引起了人们的关注发明内容0005)本发明所要髀决的问鹿是提供一种荔因工程改造野生芽胞菜生产5羟荔色翅酸的方法.0006本发明所要解决的问时是提供一种基因工程改造野生芽抱菌生产S-羟基色氨酸的工程的，具有高效的色熬酸5位羟化性能,0007)为实现上述目的，本发明提供了如N方案：0008本发明所用野生芽泡菌为筛选自化工厂附近土逑中的功能菌.可以将色飒酸转化为五-羟基色飒酸.此野生芽胞苗为研究色氨酸对西红柿及草储根部施肥试胎中所得，0009本发明提供种基因工程改造野生芽他的生产5胫璃色依酸的方法，所筛选野生芽胞菌虽可将色魁酸弱化为5羟基色史酸，但生产能力低下，通过高表达甲酸脱气的将因，有效再生两种还原性辅因子NAD和NADP+,间接强化了施内色飒酸羟化反应.显著提高5-HTP的产量.(OOIO)本基因工程而改造使用质粒为pZE12TucpCS27、和pSA74中的种或两种。(OoII)本基因工程苗采用的脱级版基闪及序列甲酸脱乳筋(FDH1>mRNA序列：1atgtcgaagggaaaggtttgctggttctttacgaaggtggtaagcatgctgaagagcag61gaaaagttattggggtgtattgaaaatgaaCttggtatcagaaatttcattgaagaaug121ggatacgagttggttaactaccattgacaaggaccctgagcCaaCctCaaCggtagacagg181gagttgaaagacgctaaattgtcattactacgccctttttccccgcctacatctcgaga241aacaggattgCagaagctcctaacctgaagCtctgxgtaaCCgCtggCgtCggttcagac301catgtcgatttagaagctgcaaatgaacggaaaatcacggtcaccgaagttactggttct361aacgtcgtttCtgtcgcagagcacgttatggccacaattttggttttgataagaaactat421aatggtggtcatcaacaagcaattaatggtgagtgggataUgccggcgtggctaaaaat481gagtatgatctgaagacaaaataatttcaacggtaggtgCCggtagaattggatatagg541gttctggaaagattggtcgcatttaatccga邺aagttactgtactacgaCtaccaggaa601Ctacctgcggaagcaatcaatagattgaacgaggccagcaagcttttcaatggcagaggt661gatattgttcagagagtagagaaattggaggatatggttgCtcagtcagatgttgttacc721atcaactgtcSttgCaCaaggacaaggMttattCaataaaaagcttattccac781atgaaagatggtgcatacttggtgaataccgctagaggtgCtatttgtgtCgcagaagat841gttgccgaggcagtcaagtctggtaaattggctggctatggtggtgatgtCtgggataag901caaccagcaccaaaagaccatccctggaggaCtatggacaataaggaccaCgtgggaaac961gcaatgactgttcatatcagtggcacatctCtggatgctcaaaagaggtaCgctcaggga1021gtaaagaacatcctaaatagttaacttttccaaaaagtttgattaccgtccacaggatatt1081attgtgcagaatggttcttatgccaccagcttatggacagaagaaata甲酸脱1.fiV<FDH16)mRNA序列：1cagcacttcgIccgttgggctagctgggcagcgaaacaggCCggCCaCgtaaccacggga61gcttttgctgCCgtgttctctacgccaaatgagttgctctattaccccacaacaaagctt121catgtcaccaatgaagtcatatgaactttgaaccggtctcacaatgccgagctttctgcg181agacacgtccagacaactgtgagtagacatcaccagacggacggggcagtaatcgtgat241gagcaatcggagagcttgtacatgtccttcgtacatacgaCggtagcaaaCgatCaCgeC301gagacgtaagCCggagaggggttagacaacgcgcgggacgggatgcacgggatgaaatca361tgaagggagcUcaggggtgacgatctgtatgagggacagctcagcttcctaacataaat421acggaccagcCgctcgccatCtcggcatcttggaggaaaccaatgacacaCgaattcttt481tgtcaatcctgccagtctgagcttaacacgaacggggagtgtccgttctcacctacca541CgtataataaCaaggtageCtcgcgctgtcgcaccacctcCtctgactttcctctctccc601tccgtcccaggactctgttcIctaggattcacgagcgattCtagaatcaaUgacgtcgg661gcgtctcaaaCaCCaCaaggaaacagataaTacacgaaacacgtcaaaatggtatcttta721CgccccttgtCCCgtUtCtccctctcgctIcccgagctgccctcttttcaacttgttcc781gctgcctcagctcgtcctgcttcgcttcgagctgccggcttcgccaacaagctgtctacg841tcacctctgtCttctgcgaagccacgcttcCtgccgtcatCgatgcgtgcgctgacaacc901gcgcgtgaaaaggtcaaagttctcctctgtacctacgacggtggccagcaCgccaaggat96IgttcCtgaaCtgctcggtacgactgagaatgaacttggccHaggaaatggctggaggac1021Cagggccacactctcgtcaccacatcagacaaggagggtgacaattccaagttcgaccaa1081gaacttgtagatgccgaagtCatCattacCactccctttcaccctggctaCCtgaaggag1141aagcgtttccaaggctaagaagctgaagCtCBCtatCaCCeCgegtatCggctcagac1201cacattgacctcgaccttgcCaaCaagaCtaatggtggtaHacggtcgcCgaagtcact1261ggcagtaatgtcgtctccgttgctgagcacgttgttatgaCCatatggtattgattcgg1321aactttgttcccgcccacgagcaggtggagCggggtgactggaatgttgcggccgtcgcc1381aagcaggaatatgaccttgagaacaaggtcgttggtacgttggtgtcggtCgtatcggt144IgagcgtgttttgcgacgactcaagccgtttaactgcaagctcctgtacacCgactaccag1501CCtCtgagtcCtgagacgcagaaagaaatcggctgtgagcgtgtggcattCgaggatttg1561Ctaaaacagtgcgacattatcaccatcaactgccctttgcatgcggagacagaagggttg1621UtcacaaggacaacattgcCCtgatgaagCCtggCtjtacctcatacactgctcgt1681ggceccttgttgtgaaagaacacgtcgctgaggccctggagtctggccaCCtagCCggt1741tacggcggtgatgtctggtacccccagcccgctgaaccagaccacccactgcgaaccgcc1801aagaacccattCggaggtggcaacgccatggtcccccacatgtctggaacttcgc11gat1861gctcagaagcgctatgccgaaggtacaggctattcttgaaagctacttgagcggag192IcatgactaccgtccagaggaCttgattgttCaCaagggCagctacgccacCaggg(Xtat1981ggtgaagacaagaaaacatcUgaagaaacaatgtgaaggCtattaatccCgggttctca2041CCtcacggctgatgagtgatgcagtgtttgtacatgaaggatatctaggagagttgattt2101aatgcaatgacaaagatttKtgctgataage甲酸脱氧1.<ocus)mRNA序列：1atggtcaaagtgagtattggcaagatccccCtctattgagatatatgctgatcataacgc61CcatcgtaggttcttgcgatKtctactctggaggcaagggtatgttctcUtcttaatc121ccttgtggtaaaagatctgcagttaactagtgtggttagctgccgaagaggaaagccgAC181tcctcggtacCgtcgaaaacagacttggctUgctgattggctcaagaaagagggccacg241agtaagtgttCggtgacttttgggatagtaagtcaagagaBCCagtCgggCtgaccatgt301CCtCtatCCCagatttgttgtcactgccgacaaggagggtCCcaaCtCtgagttccagaa361gcacctttccgacgtacgtatcacatcatggctgacatgaCaagaCctgaCCtgCtgC(X421ttttagactgagatccttatcaccacccctttccaccctggctaccttacCgccgagctc481atggaaaaggCtcctaagctCaagctttgtgtaactgctggtgttggatctgagtaagtt541gaatgactttcutccttgcUggtggaaagttcatggatGaatCtatagCCaCatCBaC601Cttgaagccgccaacaagaagaagatcactgtggctgaggtttctggctccaacgttgtg6