核酸定量荧光计校准规范.docx
中华人民共和国地方计量技术规范JJF（翼）3024-2023核酸定量荧光计校准规范Ca1.ibrationSpecificationforF1.uorescenceMetersofNuc1.eicAcid2023-07-01实施2023-05-31发布河北省市场监督管理局发布JJF（冀）3024-2023核酸定量荧光计校准规范Ca1.ibrationSpecificationforF1.uorescenceMeicrsOfNucIcicAcid归口单位：河北省市场监督管理局起草单位：河北省计量监督检测研究院北京市计量检测科学研究院天津计量监督检测科学研究院本规范委托河北省计量监督检测研究院负责解释本规范主要起草人：刘红彦（河北省计量监督检测研究院）史盼敬（河北省计量监督检测研究院）赵雨佳（北京市计量检测科学研究院）常子栋（天津计量监督检测科学研究院）参加起草人：杨迪（河北省计量监督检测研究院）梁亮（北京市计量检测科学研究院）范培蕾（北京市计量检测科学研究院）目录引言(11)1范闹<1)2概述(I)3计量特性(I)4校准条件<1)4.1 环境条件(I)4.2 测量标准及其他设备(I)5校准项目和校准方法<2)5.1 示值误差(2)5.2 测量重任性(2)6校准结果表达<2)7曳校时间间隔(3)附录A校准记录格式(推荐)(4)附录B校准证书内页格式(推荐)<6)附录C示值误差的不确定度评定示例<7)引言JJF1071-2010国家计砧:校准规范编写规则3,JJF1001-2011通用计量术语及定义、JJF1059.1-2012£测量不确定度评定与表示共同构成支撑本规范制修订工作的基础性系列规范。本规范的制定，参考了JJF1836-2020微量分光光度计校准规范和JJF1828-2020ATP荧光检测仪校准规范相关内容。本规范为首次发布。核酸定量荧光计校准规范1范围本规范适用于测量双性DNA浓度在(10-100)ng1.范围的非扩增型核酸定量荧光计的校准。2概述核酸定量荧光计(以下简称荧光计)的原理是荧光染料和核酸分子特异性结合后在特定波长卜一发光，发光强度与核酸浓度成正比，根据荧光强度可以推算出样本中的核酸浓度。荧光计由光源、检测仓、控制面板以及数据采集信号处理系统组成3计量特性仪涔各项计量特性指标见表IoI核酸定量荧光计计量特性指标计量项目计量特性示值误差不超过±20%测后池复性W10%注：以上计量特性要求是基于双镂DNAiw计模式得到，仅供参考，不作为判定依据，4校准条件4.1 环境条件4.1.1 环境温度：(153O)4C.4.1.2 相对湿度:(15-70)%。4. 1.3供电电源:电压<220±22)V,频率(5()±1.)Hz.,4.2测量标准及其他设备42.1核酸标准物质：国家有证双链DNA标准物质，浓度(1O1(X)ng1.,相对扩展不确定度不超过10%(A=2).4.2.2移液淞：(1IO)1.,(2(卜200)1.,经计量检定合格，5校准项目和校准方法5. 1示值误差在（101.（X）ngU1.浓度范围内，选择高、低两个浓度的国家仃证双链DNA标准物质,每种标物检测3次,按照公式（1）计算.00%(I)式中:X示值误差，%："X仪泯3次测信值的算术平均值，ng1'1.:X0标准物质的标准值，ng1.,5. 2测量重发性选择I种浓度范围在（10700）ng1.的国家有证双链DNA标准物质放入仪器检测,该样品重复检测IO次,按照公式（2）计算测量重电性.-0(1.%式中:RSD相对标准偏差，%：X仪器IO次测量值的算术平均值，ng1.iXi单次测定值，ng1.:n测定次数：I测定的序号，i=1.-IO.6校准结果表达校准结果应在校准证书上反映,校准他书应至少包括以卜信息：a）标题：“校准证书”：b）实验室名称和地址；c）进行校准的地点（如果与实验室的地址不同）；d）证书或报告的唯一性标识（如编号），每页及总页数的标识:e）客户的名称和地址；f）被校对象的描述和明确标识：g）进行校准的日期，如果与校准结果的有效性和应用有关时，应说明被校对象的接收日期：h）如果与校准结果的仃效性和应用有关时，应对被校样品的抽样程序进行说明：i）校准所依据的技术规范的标识，包括名称及代号：j）本次校准所用测量标准的溯源性及有效性说明：k）校准环境的描述：1）校准结果及其测用不确定度的说明：m）对校准规位偏离的说明：n）校准证书签发人的签名、职务或等效标识以及签发日期：o）校准结果仅对被校对象有效的声明：P）未经实瞪室书面批准，不得部分处制证书或报告的声明。7复校时间间隔建议复校时间间隔一般不超过一年。复校时间间隔的长短是由仪器的使用情况、使用者、仪器本身质量等因素决定，送校单位也可根据实际使用情况自主决定更校时间间隔。如果仪器经维修、更换重要部件或对仪器性能有怀疑时，应重新校准。附录A校准记录格式(推荐)记录编号：委托单位:仪器名称:型号：制造厂：出厂编号:环境温僮：M1.对湿度：校准日期：校准依据：主要计量标准零名称测量范围不确定度/准确度等级/嫉大允许误差检定/校准证书编号溯源单位有效期至一、示值误差标准物质标准值(ng1.)测出侑(ng1.>平均值(ng1.)示值误差(%)扩展不确定度<A=2>:、二量施复性标准物质标准假(ng1.)测值(ng1.)平均值(ng1.)气更性(%)扩展不确定度(.k=2)附录B校准证书内页格式(推荐)校准结果校准项目校准结果示例误差标准物质标准值(ng1''1.)测量(ft<ng1.)示值iR差(%)扩展不确定度(*=2)测Ift型更性标准物质标准值<ng1.)测量值<ng1.>测肤Hi复性(%)扩展不确定度(*=2)核验员:校准员:附录C示值误差的不确定度评定示例C.I概述C1.I测量方法选择ThCrmOFishcr公司的QUbiM型核酸定量荧光计进行校准。根据校准规位的要求，通常选择(10700)ng1.浓度范围内的核酸标准物质，盎复测量3次，计算示值误差。C.I.2测量标准标准物痂：国家有证双链DNA标准物质，浓度范闱(IOMOO)ng1.,相对扩展不确定度UId<10%(Jfc=2)。移液器：(1-10)g1.、(2O*-2OO)1.C.2测量模型示值相对误差的测量模型为：V-''X100%X、<c.D式中：X示值误差，%；-X仪器3次测址值的算术平均值，nfr1.;Xo标准物质的标准值，ng1.o两个址又和X1.)相互独立，根据公式(C1.),相对示值误差的合成标准不确定度可表示为："3)=符(丁)+6(1)<c.2)式中，星敏度系数I,灵敏度系数：£”二-1。axa、,、C.3不确定度来源分析示值误差校准结果的不确定度来源主要为：a)测量平均值引入的不确定度分量，(k)：b)标准物质的标准值引入的不确定度分量“(X。)。C.4各不确定度分量的评定C.4.1测量平均值引入的不碑定度分量“(3)该不确定度分量由测量重览性引入，在(01.(X)ngU1.范闹内，选择浓度为31.4ng411.和85.7ng1.的国家有证双链DNA标准物质，分别重更测量IO次，数据见表C.I。按照贝寒尔公式(C.3)计算标准偏差，计算得出的标准偏差即为单次测量值的不确定度，实际校准时，仪器示值采用3次测证值的平均值，因此测量平均值的标准不确定度按照公式(C.4)计算，计鸵结果见表C.I。1.(A.-x)j.Jj三(C.3)(C.4)表C.I重复性引入不确定度皴据标准值(ng,1.)测肽值(np,1.)5(ng1.)小)<ng.11.)31.435.435.135.936.036.135.135.035.234.934.50.520.3185.781.482.481.882.382.181.4«1.781.882.28230.370.22C.4.2标准物质的标准值引入的不确定度分量“(X。)标准值的不确定度由标准物质证书给出，按照公式(C5>计算得到标准不确定度N(凡),见表C.2。M(X11)=X11X<C.5)表C.2标准物质引入的不确定度标准值(ng1.)相对扩展不确定度Uni(k=2)标准不确定度”(X。)31.49.8%1.54ng,1.85.73.0%1.29ng,1.C.6合成标准不确定度由表C.3中标准物质的标准值和两次测量结果的平均值，分别计算得到灵敏度系数G和G。按照公式(C.2)示值误差测量结果的合成标准不确定度见表C3°表C.3合成标准不确定度标准值<ng(1.)泅量(ft<ng1.)平均值(ng<,1.)G币)QH(Xo)z(k)I2331.435.435.135.935.50.0320.31-0.0361.545.7%85.781.482.481.881.90.0120.220.0111.291.5%C.7扩展不确定度U=U(X)×(C.6)取包含因子Q2,由公式(C6)计算得到示值误差的扩展不确定度见表C.4。表C.4合成标准不确定度及犷展不确定度标准值<ng,1.)平均值(ng1.)合成标准不确定度扩展不确定度(*=2)31.435.55.7%11.4%85.781.913%3.0%JJF（冀）3024-2023
