293T细胞培养操作规程.docx

题目：293T细胞培育操作规程1月的293T细胞是常用于包装和扩增病毒载体的工具细胞，因此做好293T细胞的培育，为保证相关试验的正常进行供应必要条件。2适用范围本部门293T细胞培育3操作方法3.1 将移液器和移液枪、15ml离心管、离心管架、75Cm2新的细胞培育瓶放于生物平安柜中，根据生物平安柜的标准操作规程，将生物平安柜的紫外开启半小时。3.2 将含10%胎牛血清和100Uml双抗的DMEM及PBS放于37水浴锅中预热。3.2.1 将已长到80%90%的293T细胞培育瓶从37口，5%的CO2培育箱中取出，先用75%的酒精喷洒于瓶表面，将细胞培育瓶旋转放于生物平安柜中，用无菌的移液管吸净其中的培育基，加5ml的预热的PBS洗涤一次，吸净PBS。3.2.2 将含EDTA-0.25%tyption用PBS稀释两陪到五倍，向该75cm2的细胞瓶中加入3ml稀释好的EDTA-0.25%tyption,让其充分平铺于细胞表面。盖好瓶盖，将细胞瓶放在显微镜下视察，直到细胞变圆，加含10%胎牛血清的DMEM终止反应，用移液管轻轻将瓶上的细胞吹下，将细胞液移到15ml无菌的离心管中，100orPm离心3分钟。3.2.3 将离心上清吸弃掉，用手指轻轻拍打离心管底将底部细胞分散开，再加3mlDMEM培育基将分散的细胞重悬稀释开，取肯定量的细胞液进行n倍稀释后计数，根据细胞计数标准操作规程进行。3.2.4 计数好之后细胞传代密度根据2-5×104个细胞/cm?的培育瓶中IomlDMEM培育基，放于37口，5%的C02培育箱中培育。3.2.5 24小时后视察细胞状态，待细胞长到80%90%时进行下一次传代培育